Kaum hat Alice (Milla Jovovich) das Rätsel um das Schiff "Arcadia" gelöst, kam bereits eine Staffel von Umbrella-Flugzeugen auf sie und all die befreiten Menschen zu.
Der Film setzt nach diesem Ereignis ein, als Alice, die vermutlich letzte Hoffnung für die gesamte Menschheit, im Herzen eines geheimen Labors der Umbrella Corporation erwacht. Dort enthüllt sie einige der rätselhaften Geheimnisse ihrer ungewissen Vergangenheit, als sie diese Operations-Anlage erforscht.

Als sie sich aus dem Komplex befreit hat, jagt sie, ohne einen sicheren Zufluchtsort zu haben, den Verantwortlichen für den Ausbruch des tödlichen T-Virus hinterher, der alle Lebewesen bei einer Infizierung in fleischfressende, infektiöse Untote verwandelt.
Diese Jagd führt Alice um die halbe Welt; von Tokyo über New York nach Washington D.C. und Moskau. Während ihrer Reisen muss sie sich gegen Massen von infizierten Zombies zur Wehr setzen; ganz ohne ihre besonderen Fertigkeiten, die ihr im Vorgängerfilm, "Resident Evil: Afterlife", genommen wurden.

Auf dem Weg findet sie allerdings neue Gefährten ebenso wie alte Freunde, die ihr tatkräfig zur Seite stehen und sie auf ihrer Reise unterstützen.
Auf ihrem Feldzug gegen die Verantwortlichen des Virus-Ausbruches macht Alice eine Entdeckung, die sie dazu zwingt, alles was sie zu wissen glaubte, zu überdenken. Nichts scheint zu sein, wie sie geglaubt hatte.

Doch trotzdem bleibt ihr aller Ziel das Gleiche: Überleben.
Überleben, um Rache zu nehmen. Überleben, um die Wahrheit zu finden. Überleben, um einer Welt kurz vor dem Untergang zu entgehen...